Ο Ευστάθιος Τσούκαλος γεννήθηκε στο Μεσολόγγι και αποφοίτησε από τη Παλλαμαϊκή σχολή Μεσολογγίου το 1964. Τον ίδιο χρόνο εισήλθε στην Ιατρική Σχολή Αθηνών από την οποία αποφοίτησε το 1970. Ακολούθησε η στρατιωτική του θητεία για δυο χρόνια (1971-1973 ) ως οπλίτης γιατρός και μετά η θητεία του ως αγροτικός γιατρός (1973-1974) στο Αγροτικό Ιατρείο Στάμνας Μεσολογγίου. Από το 1974 εως το 1978 υπηρέτησε διαδοχικά στα νοσοκομεία Γ.Κ.Ν.Α. (μετέπειτα Νοσ. Γ.ΓΕΝΝΗΜΑΤΑΣ), νοσοκομείο ΕΛΠΙΣ και ΑΛΕΞΑΝΔΡΑ στην Α’ Πανεπιστημιακή Μαιευτική-Γυναικολογική Κλινική της Ιατρικής Σχολής Αθηνών, από όπου έλαβε την ειδικότητα του μαιευτήρα-γυναικολόγου. Από το 1979 έως το 1986 παρέμεινε ως ειδικευμένος βοηθός στην Α’ Πανεπιστημιακή Κλινική Ν. ΑΛΕΞΑΝΔΡΑ, όπου παράλληλα εκπόνησε τη διδακτορική του διατριβή και αναγορεύτηκε Διδάκτωρ της Ιατρικής Σχολής του Πανεπιστημίου Αθηνών το 1984.

Εργάστηκε μετά στον ιδιωτικό τομέα και το 1993 προσλήφθηκε ως επιμελητής Α΄ στο Μαιευτήριο ΕΛΕΝΑ ΒΕΝΙΖΕΛΟΥ, παραμένοντας ως Διευθυντής μέχρι το 2013. Έκτοτε εργάζεται ως ελεύθερος επαγγελματίας στον ιδιωτικό τομέα. Πέρα και παράλληλα με την επιστημονική και επαγγελματική του σταδιοδρομία έχει αναπτύξει έντονη και μακροχρόνια, συνδικαλιστική δραστηριότητα.